Світло від лампи розжарювання через ряд оптичних систем направляється на світлофільтр. Отриманий монохроматичне світло направляється в кювети з розчином і розчинником, в них частина світла поглинається. Минулий через оптичні системи
світло потрапляє на фотоелементи. Величина виникає струму пропорційна величині падаючого світла. Очевидно, що через розчинник проходить світла більше, ніж через розчин; в системі виникає оптичне нерівновага, яка реєструється відхиленням стрілки гальванометра або розширенням темного клина індикаторної лампи. На шляху пучка світла, що проходить через розчинник, поставлена діафрагма, пов'язана з відліковим пристроєм фотоколориметр. обертанням отсчетно-
го барабана зменшують діафрагму і домагаються рівноваги оптичної щільності і повернення стрілки гальванометра на нульову позначку. Відлік на барабані дорівнює оптичної щільності.
Рефрактометричні методи визначення загального білка сироватки засновані на здатності розчинів білка до заломлення світлового потоку. При температурі 17,5 ° С показник заломлення води дорівнює 1,3332, при тій же температурі показник заломлення сироватки коливається в межах 1,3480-1,3505. У зв'язку з тим, що концентрація електролітів і небілкових органічних сполук, що впливають на її здатність заломлення, невелика і досить постійна в сироватці здорової людини, величина показника заломлення сироватки крові залежить в першу чергу від вмісту в ній білків. Калібрування приладу проводять сироваткою з відомою концентрацією білка. Простота робить рефрактометрі зручним методом для визначення вмісту загального білка в сироватці крові, хоча при ряді захворювань, зокрема, при цукровому діабеті, хронічній нирковій недостатності його використання може призводити до суттєвої помилку.
Осадження білків - процес зняття гідратної оболонки і заряду.
Два види реакцій осадження:
1) висолювання білків - оборотний процес; знімається тільки гидратная оболонка, білок зберігає структуру і нативні властивості;
білкові частинки утворюють великі агрегати і впадають в осад під дією сили тяжіння (седіментіруют).
-висолювання білків сульфатом амонію
-висолювання білків хлористим натрієм
поверхню нативной білкової молекули завжди мозаїчна, має місце чергування гідрофільних і гідрофобних груп амінокислотних залишків. При незворотному осадженні білків порушується нативная конформація, втрачається мозаїчність, а значить здатність виконувати функції. Цей процес називається денатурацією
-осадження білків солями важких металів (CuSO4 і Pb (CH3COO) 2)
-осадження білків концентрованими мінеральними кислотами (HNO3 конц. і H2SO4 конц.
- осадження білків органічними кислотами (CCl3COOH і сульфоцілсаліціловая кислоти)
Висолювання - це зверни моє осадження білків з розчинів за допомогою високих концентрацій нейтральних солей: сульфату амонію, сульфату магнію, хлориду натрію. Механізм висолювання полягає в дегідратації білкової молекули і зняття заряду. На процес висолювання впливають: ступінь гідрофільності білка, його заряд, молекулярна маса. Тому для висолювання різних білків потрібна різна концентрація одних і тих же солей, різні умови рН середовища. Висаліваются дію іонів залежить від з дегідратірующей здатності, яка характеризується становищем в Ліотропні ряду Гофмейстера:
F-> Cl-> Br-> NO3-> I-> CNS-
Li +> Na +> К +> Rb +> Cs +> Mg2 +> Ca2 +> Sr2 +> Ba2 +
Висолювання широко використовується як метод розділення білків, виділення індивідуальних білків, отримання білків в чистому вигляді
Поділом білків плазми крові на фракції за методом Кона часто користуються для отримання окремих фракцій крові, що використовуються як кровозаменителей