Культивування вірусів в лабораторних умовах - студопедія

Культивування вірусів здійснюють для лабора-битим діагностики вірусних захворювань людини і живіт-них, виготовлення живих та інактивованих противірусних вакцин і сироваток, вивчення питань патогенезу і імуно-тета.

Культивування вірусів в організмі природно воспри-імчівих тварин проводять в тому випадку, якщо дослідник зацікавлений зберегти у вірусу вихідну патогенність і анти-генні властивості.

Культивування вірусів в організмі лабораторних тварин обмежена через несприйнятливості тварин до багатьох

Одним з найбільш доступних і зручних методів для виокрем-лення і культивування вірусів є використання кури-них ембріонів. У курячих ембріонах здатні розмножуватися віруси з різних тропизмом, оскільки вони містять чотири субстрату для вірусу - амніон, алантоіс, хоріоналлантоісной мембрану і жовтковий мішок.

Індикацію вірусів в курячих ембріонах здійснюють за характером ураження тіла і оболонок ембріона, а у гемагглюті-нірующіх вірусів - в реакції гемаглютинації (склеювання еритроцитів).

Віруси - це абсолютні внутрішньоклітинні паразити, ко-торие не здатні розмножуватися в жодній з безклітинних поживних середовищ. У 1949 році Д. Ендерс, Т. Уеллер і Ф. Роббінс повідомили про те, що вірус поліомієліту може размно-тулитися і викликати характерні зміни в культурах не з нервової тканини. Завдяки цьому відкриттю стало можливим вирощування вірусів в клітинних культурах, а також вдалося виділити і описати безліч раніше невідомих вірусів. От-криті аденовірусів, луна і риновірусів, розробка вакцин проти поліомієліту, кору і краснухи безпосередньо связа-ни з використанням культур клітин.

Для культивування різних вірусів використовують привчає-ні, диплоїдні і перещеплюваних клітинні лінії.

Первинні культури клітин отримують з подрібнених жи-Вотня тканин, обробляючи їх протеолітичнимиферментами. Після відмивання і підрахунку клітин суспензію розбавляють середовищем і дають можливість клітинам прикріплятися до плоскої поверхні-ти скляній або пластмасового посуду. Клітини швидко при-закріплюють до поверхні і при оптимальних умовах діляться приблизно один раз в день. Первинні або первічнотріпсінізі-рова культури клітин здійснюють не більше п'яти-десяти поділів. Для лабораторних досліджень і виробництва вакцин їх отримують з ембріональних тканин людини (нирок, амніону), мавп, мишей, курячих ембріонів.

Диплоїдні клітинні культури являють собою клітини фібробластів, отримані з ембріонів людини. Вони можуть здійсню-вати до 100 поділок, зберігаючи при цьому свій вихідний дип-лоідний набір хромосом.

Перещеплюваних клітинні лінії - це клітини одного типу, здатні розмножуватися in vitrо невизначено довго, їх напів-ють з трансформованих клітин. Часто вони втрачають сходст-во тими клітинами, від яких відбулися, зазнаючи в тече-ня тривалого культивування послідовні мутації. Перещеплюваних клітинні лінії Нер-1, Нер-2, Не1а і КВ ведуть н ачало від карцином людини. Ці лінії, а також лінії, від-ходять від клітин тканин мишей (L929), хом'ячків (ВНК-21) широко використовуються в експериментальній вірусології.

Про розмноження вірусів в культурі клітин можна судити по датопатіческому ефекту - ЦПЕ (див. Вкл. IV); утворенню в кліть: ах вірусних включень; бляшкам в клітинному монослое; явле-нию гемадсорбції; зміни кольору індикатора живильного середовища для клітин.

Схожі статті