Предметні скла, на яких готують препарати, повинні бути добре вимиті і знежирені. Кров береться з дотриманням правил асептики. Шкіру пальця протирають спиртом і проколюють простерилизованной голкою-списом або товстої ін'єкційної голкою. Якщо кров з м'якоті пальця випливає погано, то хворого просять зробити кілька енергійних рухів рукою, пензлем і злегка масажують палець. Першу виступила краплю крові витирають сухою ватою, потім палець повертають проколом вниз і до другої краплі торкаються предметним склом.
Тонкі мазки крові готують за методикою, загальноприйнятою для гематологічних досліджень. Мазок не повинен доходити ні до кінця, ні до країв предметного скла. Тому крапля крові повинна бути діаметром не більше 2 - 3 мм. Предметне шліфоване скло, яким робиться мазок, має бути вже скла, на яке наносять мазок. Для цього кути шліфованого скла відламують пінцетом. З метою приготування мазка шліфоване скло ставлять перед краплею крові під кутом 45 ° і просувають вперед до зіткнення з нею. Коли кров рівномірно розподілиться між обома стеклами, швидким рухом роблять мазок.
Дуже зручно наносити товсту краплю на вологий товстий мазок крові. В цьому випадку крапля самостійно розтікається в правильний диск. Простим олівцем на мазку робиться маркування препарату Такий препарат зручний ще й тим, що в мазку досить добре зберігається частина уражених еритроцитів, а це важливо для уточнення виду паразита. Перевага даного методу в тому, що крапля, нанесена на мазок, утримується міцніше, ніж нанесена безпосередньо на скло.
Приготовлені товсті краплі висушують при кімнатній температурі не менше 2 - 3 год без будь-якого додаткового підігрівання щоб уникнути фіксації крові. Після висихання краплі на неї наливають фарбу Романовського - Гимзе, розведену як зазвичай (2 краплі фарби на 1 мл дистильованої води). Тривалість забарвлення в середньому становить 30 - 45 хв. Забарвлену краплю обережно мити водопровідною водою (сильний струмінь може змити краплю) і просушують у вертикальному положенні. Фільтрувальної папером її висушувати не можна. При фарбуванні краплі у водних розчинах фарб відбувається вилуговування гемоглобіну з еритроцитів, внаслідок чого в пофарбованої краплі еритроцити вже не видно. З формених елементів зберігаються лейкоцити і тромбоцити.
Мазки фіксують, поміщаючи їх на 3 хв в метиловий або на 10 хв в 96% етиловий спирт. Зафіксовані препарати висушують на повітрі, захищаючи від пилу і мух. Потім препарати поміщають в спеціальний контейнер і забарвлюють АЗУР-еозіновим барвником за Романовським - Гімзою протягом 20 - 30 хв.
Після закінчення цього терміну контейнер підставляють під слабку струмінь води і промивають. Після того як з контейнера поллється неокрашенная вода, залишки її зливають і промивають ще раз. Не рекомендується спочатку зливати фарбу, а потім промивати мазок водою, оскільки плівка, що утворилася на поверхні барвника, може потрапити на препарати і виявитися причиною діагностичної помилки. Крапля на мазку забарвлюється так само, як товста крапля.
Промиті препарати висушують і досліджують під мікроскопом. У заражених еритроцитах видно плазмодії малярії з блакитною цитоплазмою і яскраво-червоним ядром. Знаходження плазмодіїв малярії в крові хворого є незаперечним доказом хвороби.
Визначення інтенсивності паразитемии при малярії. Досить точний метод зводиться до підрахунку середнього числа паразитів на одне поле зору товстої краплі. Якщо паразитів багато, то підрахунок ведуть в 10 полях зору, якщо мало в 100. Чисельність вказують окремо для виявлених стадій паразита, наприклад, р. falciparum кільця +++, гаметоцити +. Стосовно до чисельності кілець ВООЗ рекомендовані наступні символи:
1 - 10 в 100 п. Зр = +.
більше 10 в п. зр. = + + ++
більше 100 в п.зр. = + + + + +
Лаборанти з високим рівнем підготовки застосовують більш точний метод, а саме, підраховують чисельність паразитів по відношенню до числа лейкоцитів. Наприклад, в товстій кишці на 100 лейкоцитів знайдено 20 паразитів.
Допускаючи, що у хворого 4.000 лейкоцитів в 1 мкл крові, легко встановити:
в досліджених полях зору - 100 лейкоцитів і 20 паразитів в 1 мкл є 4000 лейкоцитів і Х паразитів. Отже, в 1 мкл: 4000х20 / 100 = 800 паразитів. Підрахунок буде ще більш точним, якщо в формулу ввести конкретне, а не ймовірне число лейкоцитів у даного пацієнта. При дуже високій паразитемии її інтенсивність може бути охарактеризована числом паразитів на 100 еритроцитів, підрахованих в тонкому мазку.